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口服猪脾来源免疫抑制组分抗炎作用的实验研究

作者：王凤山¹，袁勤生¹，程艳娜²

作者单位：1. 华东理工大学生物工程学院, 上海 200237； 2.山东大学药学院, 山东 济南 250012

摘　要：目的　研究口服mr小于5000的猪脾来源免疫抑制组分(sisc-p)的抗炎作用。方法　通过给动物igsisc-p,观察其对巴豆油致小鼠耳廓肿胀和对大鼠棉球肉芽肿的影响。结果　igsisc-p一次给药对巴豆油致小鼠耳廓肿胀没有影响,多次给药在一定剂量(10mg·kg^-1)则有显著的抑制作用（p＜0.05）;在实验剂量(16,8和4mg·kg-1)下,sisc-p对大鼠棉球肉芽肿均有显著的抑制作用,其中高剂量和中剂量的作用效果较好。结论　igsisc-p多次给药对急性炎症和亚急性炎症均有对抗作用.

关键词：猪;脾;免疫抑制;抗炎作用

猪脾来源的免疫抑制组分（sisc-p）是该来源的免疫抑制提取物^[1]中mr小于5000的组分，该组分主要由多肽和核酸类物质组成。主要由多肽和核酸类物质组成。免疫药理学研究表明^[2]，ig sisc-p对小鼠巨噬细胞吞噬功能、迟发性变态反应(dth)及绵羊红细胞(srbc)特异抗体的生成均有抑制作用，说明sisc-p是一种对细胞免疫和体液免疫均有抑制作用的免疫调节剂。免疫抑制剂大多有抗炎作用，因为许多免疫反应的表现就是炎症反应。为了进一步了解sisc-p的药理学作用，本实验研究了sisc-p的抗炎作用。

1　材料与方法

1.1　药品与试剂

sisc-p，按文献^[1]制备：取猪(sus scrofa domestica brisson)脾，绞碎，用酸性氯化钠溶液提取去除免疫促进成分后，用0.1mol·l-1氢氧化钠溶液提取，经等电点沉淀和加热变性除杂蛋白，超滤取mr小于5000的组分，即得。以多肽含量作为其含量和质控主要指标，每1ml含多肽4.0mg。

地塞米松磷酸钠注射液(dex，济南永宁制药股份有限公司)，用前以生理盐水(ns)配成所需浓度；巴豆油(山东省中医药研究所)。

1.2　动物

昆明种小鼠，体重(20.0±1.5)g，♀♂兼用；wistar大鼠，体重(174.0±6.7)g，♂。以上动物均由山东医科大学实验动物中心提供。

1.3　sisc-p对巴豆油致小鼠耳廓肿胀的影响实验

1.3.1　一次给药对巴豆油致小鼠耳廓肿胀的影响实验

参照文献方法^[3]进行。取小鼠50只，随机分为sisc-p20，10和5mg·kg^-1组；dex 2mg·kg^-1组及等容量的ns组(0.3ml·10g^-1)，共5组，每组10只。按上述剂量ig给药1h后，给每只小鼠右耳涂抹巴豆油50l，左耳对照。4h后将小鼠脱臼处死，沿耳廓基线剪下两耳，用直径7.5mm的打孔器分别在左、右耳同一部位打下圆耳片，称重，求左、右耳片重量之差作为肿胀度，用t检验比较组间差异显著性。

1.3.2　多次给药对巴豆油致小鼠耳廓肿胀的影响实验

取小鼠50只，分组及给药剂量同“1.3.1”项。1d ig给药1次，连续7d，于末次给药后l h每只小鼠右耳涂抹巴豆油50μl，左耳对照。4h后将小鼠脱臼处死，同上述方法求肿胀度，比较组间差异。

1.4　sisc-p对大鼠棉球肉芽肿的影响实验

参照文献方法^[4]进行。取大鼠50只，随机分sisc-p16,8,4mg·kg^-1组和dex1.5mg·kg^-1组及等容量的ns组(1ml·100g^-1)，共5组，每组10只。然后在乙醚浅麻醉和无菌条件下，于大鼠左右腹股沟处各剪一小口，以血管钳扩充皮下组织，每侧埋一(20±1)mg的灭菌棉球，尔后缝合。术后当日按上述剂量以1ml·100g^-1 ig给药，1d 1次，连续7d。

于第8天在戊巴比妥钠麻醉下取出棉球，剔除脂肪组织，在60℃烘箱中烘干12h，称重，减去棉球重，即为肉芽肿重量，最后用t检验比较各组肉芽肿重量差异，并按下式计算抑制率：

2　结果

2.1　sisc-p对巴豆油致小鼠耳廓肿胀的影响

2.1.1　一次给药对巴豆油致小鼠耳廓肿胀的影响

sisc-p各给药组与阴性对照组(ns组)相比，差异无显著性意义。说明一次给药sisc-p对巴豆油致小鼠耳廓肿胀无显著影响。见表1。

表1　sisc-p一次给药对巴豆油致小鼠耳廓肿胀的影响

注：与ns组相比，^1）p<0.001

2.1.2　多次给药对巴豆油致小鼠耳廓肿胀的影响

sisc-p10mg·kg^-1剂量组肿胀度较低，与ns组相经差异有显著性意义。见表2。

表2  sisc-p多次给药对巴豆油致小鼠耳廓肿胀的影响

注：与ns组相比，^1）p<0.05，^2）p<0.001

2.2　sisc-p对大鼠棉球肉芽肿的影响

sisc-p各剂量组的肉芽干重均明显低于ns对照组，差异有显著性意义。虽然较高剂量对肉芽肿的抑制率亦较高，但16和8mg·kg^-1两剂量对肉芽肿的抑制效果较为接近，两者作用强度无显著差异。见表3。

表3　sisc-p对在鼠棉球肉芽肿的影响

注：与ns组相比，^1）p<0.05，^2）p<0.01 ^3）p<0.001

3　讨论

脾脏是哺乳动物最大的外周淋巴器官，主要含b淋巴细胞和t淋巴细胞，对机体的免疫功能起重要的调节作用。脾脏除所含的免疫细胞参与机体的免疫外，还通过产生细胞因子来调节免疫。在以往对脾脏生物活性成分的研究中，人们将目标主要定在了其免疫调节作用，包括免疫促进调节^[5]和免疫抑制调节^[6～7] ，对脾脏生物活性成分的抗炎作用作者还未见报道。研究sisc-p的抗炎作用，对探讨脾脏生物活性成分新的功能具有重要意义，并有可能在此基础上进一步研制出作用特异的药物。

sisc-p对巴豆油致小鼠耳廓肿胀的影响实验结果表明，一次给药对急性炎症没有作用，而多次给药则有抗急性炎症的作用，说明sisc-p没有直接的抗炎作用，而是通过影响机体的某种机制来发挥抗炎作用。以往的研究已经证明^[2]，sisc-p对细胞免疫和体液免疫均有抑制作用，特别是在反映非特异免疫功能的对巨噬细胞吞噬功能影响的实验中，较高剂量(20mg·kg^-1)和较低剂量(5mg·kg^-1)的作用效果均不如中剂量(10mg·kg^-1)，与本次对急性炎症抑制的较佳剂量相吻合，从而表明sisc-p的抗炎作是通过抑制机体的免疫功能来实现的。

sisc-p对大鼠棉球肉芽肿的影响实验表明，16和8mg·kg^-1两剂量对肉芽肿的抑制效果好于4mg·kg^-1，但两个较高剂量组没有显示出明显的量效关系。原因可能是，sisc-p抗亚急性炎症的作用在一定剂量范围内呈量效依赖关系，待剂量高到一定程度后，其作用就接近饱和，再增大剂量也不发挥更大的作用。

本研究结果揭示，sisc-p对急性炎症和亚急性炎症均有抑制作用，其抗炎作用的发挥是通过抑制免疫反应来实现的，这为新型抗炎免疫药物的开发提供了一新的途径。

致谢：山东医科大学药学院朱凤昌和王爱军参加了部分研究工作。

参考文献：

［1］　冯仁田,张天民,王凤山,等.猪脾来源的免疫抑制提取物的研究[j].山东医科大
　　　     学学报,1993,31(3):258.

［2］　王凤山,袁勤生,程艳娜. 口服猪脾来源免疫抑制组分对小鼠免疫功能的影
　　　     响[j].中国药学杂志,2000,35(5):305.

［3］　张均田. 现代药理实验方法学[m].北京:北京医科大学-中国协和医科大学联合
　　　     出版社,1998:1382.

［4］　徐叔云,卞如濂,陈修. 药理实验方法学.第2版[m]. 北京: 人民卫生出版社,
　　　     1991: 722～723.

［5］　王凤山,张天民,王雷,等.从猪脾联合制备转移因子与淋巴细胞抑制因子[j],山
　　　     东医科大学学报,1988,26(2):90

［6］　lenfant m, garcia-giralt e, thomas m,et al.purification of
　　　     immunosuppressive factor extracted from bovine spleen (lymphoid
　　　         chalone)[j].cell tissue kinet,1978,11:455.

［7］　heidemann e, podgornik n, wilms k.tissue-specific inhibitor of
　　　     lymphocyte proliferation extracted and purified from calf
　　    　 spleen[j].blut,1979,39:271.